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常見的曲霉半乳甘露聚糖(GM)檢測的干擾因素有哪些?

發布時間:2019-06-19

广东快乐10分开奖助手 www.mmhqpm.com.cn 曲霉半乳甘露聚糖(GM)檢測,主要適用于侵襲性曲霉病(IA)的早期診斷。菌絲生長時GM從薄弱的菌絲頂端釋放,是IA最早釋放的抗原之一。血清與肺泡灌洗液(BALF)GM檢測對IA的診斷具有重要價值,可實現IA的早期快速診斷。然而,GM試驗存在一定的干擾因素,常見的GM假陽性因素主要有:(1)β-內酰胺類抗生素;(2)交叉反應(如組織胞漿菌、鐮刀菌、隱球菌、芽生菌病等);(3)血液制品;(4)新生兒雙歧桿菌定植;(5)其他因素等。現將GM檢測的假陽性和假陰性干擾因素總結如下:

image.png

1) β-內酰胺類抗生素(包括含有酶抑制劑的抗生素)

 A.血清樣本

關于哌拉西林/他唑巴坦(TZP)引起的GM假陽性研究有很多。哌拉西林是青霉的發酵產物,青霉細胞壁中含有GM[1]。2003年首次報道的研究發現患者使用的四批次TZP中含有GM [2]。2018年的一項研究對三個國家(PiSATM,墨西哥;VitalisTM,哥倫比亞; PfizerTM,美國)生產的TZP進行了GM檢測,結果發現只有墨西哥公司生產的TZP出現了假陽性,同時對本公司生產的阿莫西林、雙氯西林、頭孢曲松、頭孢噻吩藥品進行GM試驗檢測,均未出現假陽性[3]。目前,有證據表明世界各地(美國,意大利,巴西、美國、韓國)TZP配方已不再與GM試驗的假陽性相關。但是,一些國家(法國和土耳其)TZP配方仍然存在問題[4-9]。在中國TZP的配方是否還存在問題,目前尚不清楚。

阿莫西林/克拉維酸(AMC)是另一種被認為可引起血清GM試驗假陽性的抗生素,2004年首次報道了一例55歲的女性肺炎患者,從2004年2月2日至2月13日每日三次靜脈注射 AMC預防治療。結果發現GM檢測值從2月3日的0.06升到2月5日的4.01,在 2月12日增加到6.1 [10]。

此外,其他抗生素也有可能引起GM試驗假陽性。2010年的一項研究報道了不同抗生素引起血清GM試驗的假陽性研究。結果發現不同抗生素血清樣本GM試驗的假陽性分別是AMC(26.7%,4/15),TZP (58.3%,7/12),頭孢吡肟(CFP)(14.3%,1/7),頭孢哌酮/舒巴坦(CPZ-SB)(66.7%,2/3)[11],如圖1。

圖1 所有患者血清半乳甘露聚糖的指數和分布(N=87)。

縮寫:AM-CL,阿莫西林-克拉維酸;PIP-TZ,哌拉西林-他唑巴坦;CTX,頭孢曲松;CFP,頭孢吡肟;CPZ-SB,頭孢哌酮-舒巴坦;CBP,碳青霉烯類;FQ,氟喹諾酮;TMP-SMX,甲氧芐氨嘧啶-磺胺甲惡唑; Clinda,克林霉素;Vanco,萬古霉素

B.肺泡灌洗液(BALF)樣本

對于BALF GM的假陽性因素研究較少,目前有報道的主要有抗生素的使用以及灌洗液本身引起。

2010年研究報道了不同抗生素引起BALF GM檢測的假陽性研究。結果發現不同抗生素BALF樣本GM檢測的假陽性分別是AMC(27.3%,3/11),TZP (50%,4/8),頭孢吡肟(CFP)(16.7%,1/6),頭孢曲松(CTX)(45.5%,5/11),碳青霉烯類(CBP)(45.5%,5/11)如圖2[11]。但是目前抗生素對BALF GM的影響仍需近一步的研究確認。

圖2 所有患者BALF指數和分布(N=71)。

縮寫:AM-CL,阿莫西林-克拉維酸;PIP-TZ,哌拉西林-他唑巴坦;CTX,頭孢曲松;CFP,頭孢吡肟;CPZ-SB,頭孢哌酮-舒巴坦;CBP,碳青霉烯類;FQ,氟喹諾酮;TMP-SMX,甲氧芐氨嘧啶-磺胺甲惡唑;Clinda,克林霉素;Vanco,萬古霉素。

葡萄糖酸鹽的勃脈力(Plasmalyte)溶液,其生產是由葡萄糖在霉菌發酵產生。勃脈力可作為水、電解質的補充源和堿化劑。加入正在輸注的血液組分或作為血細胞的稀釋液。研究表明,采用含葡萄糖酸鹽的勃脈力溶液進行BALF采集會出現GM檢測假陽性,如圖3所示。

圖3 樣本的GM檢測

2) 交叉反應  

2019年最新的研究報道肺隱球菌患者隱球菌莢膜多糖與血清GM存在交叉反應。29例肺隱球菌病患者,其中16例(55.2%)患者血清GM高于cut off 值。在隱球菌病治療后,GM值顯著下降[12]。 

2012年的研究報告4例組織胞漿菌感染的實體器官移植患者,其血清或BALF出現了GM試驗的假陽性結果。與此同時,在曲霉陽性標本中也可以檢測組織胞漿抗原,從2007年1月至2010年12月,2432例曲霉GM檢測陽性患者,對其中的514例(21%)進行了組織胞漿菌抗原檢測,其中27例為GM檢測陽性[13]。  

2012年的一項研究共11例患者,其中 8例為血液系統惡性腫瘤確診為播散性鐮刀菌感染,另外三名是中性粒細胞減少可能的鐮刀菌感染患者,這11例患者中有9例出現GM檢測陽性[14]。  值得注意的是,不同廠商的GM試劑盒使用的標記捕獲抗體不同,可能導致交叉反應也不同,以上交叉反應研究結果是基于伯樂(Bio-Rad)的GM試劑盒。

3) 血液制品

2012年的一項研究收集8例非曲霉感染患者的血清樣本,接受血小板輸注前(輸注前6小時)和血小板輸注后(在完成輸注后30分鐘內)進行GM檢測。結果發現血小板輸注前GM檢測的中值為0.20,所有接受血小板輸注后GM中值為1.54,為陽性,如圖4[15]。同時,輸入免疫球蛋白也可能造成GM假陽性。

圖4  未感染患者的輸血前和輸血后半乳甘露聚糖水平

4) 新生兒雙歧桿菌定植

研究發現,雙歧桿菌屬是人類正常胃腸道微生物群落,占成人總糞便微生物群的6%,在母乳喂養和配方奶粉喂養嬰兒的糞便微生物菌群分別占到91%和75%[16, 17]。研究表明新生兒糞便均顯示GM與雙歧桿菌數量相關。由于人體腸道中存在高濃度的雙歧桿菌,這些細菌或排泄的脂多糖可能導致特別是新生兒血清GM檢測陽性[18]。

5) 其它因素

還有一些特殊的發現,如棉簽包裹的腦活檢組織,GM檢測出現假陽性結果。將干凈的棉簽灌洗樣品進行GM檢測出現陽性結果。這表明與GM產生交叉反應的表位存在與棉花中[19]。另外,有實驗室報道,當收集血清的EP管沒有保管好,被紙盒等污染也會出現GM檢測假陽性,這些問題都應該盡量避免[20]。

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在動物模型中證明兩性霉素B的預防性給藥可阻斷半乳甘露聚糖和菌絲體生長的表達[15,20,31]。  

研究表明,在診斷曲霉菌病前2周內給予伊曲康唑或兩性霉素B制劑預防性和經驗性抗真菌治療,結果發現曲霉的敏感性降低至20%以下,如圖5所示。  

2000年報告了一例慢性肉芽腫病患者,其患有侵襲性肺曲霉病和膈下膿腫。治療期間,在膿腫中能檢測到高水平的曲霉抗原,但在血清中檢測不到循環抗原和曲霉DNA。

圖5  GM檢測敏感性

綜上所述,應盡量規避對GM檢測可能產生的干擾因素。針對新入科室高度懷疑的曲霉感染患者應盡早進行血清GM的篩查,減少治療過程中因輸注血液制品和抗生素治療后產生的干擾因素;對高度懷疑的曲霉感染患者建議治療過程中進行GM連續檢測,避免單次檢測的不準確性;針對預防給藥后仍高度懷疑的曲霉感染患者血清GM檢測陰性,則可考慮BALF GM和曲霉IgG抗體檢測,提高檢測的敏感性。

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